自7月20日南京祿口機場(chǎng)檢出陽(yáng)性病例至今，除南京本地日增確診病例是兩位數外，傳播鏈已經(jīng)波及安徽、廣東、四川、重慶、湖南、遼寧、北京等多個(gè)省市。7月30日上午，南京市新聞發(fā)布會(huì )就本輪疫情源頭疾控中心通報稱(chēng)，目前已完成本土疫情相關(guān)的52個(gè)病例的病毒基因測序工作，均屬于德?tīng)査局?/strong>；病毒基因組序列高度同源，提示是同一個(gè)傳播鏈。

據專(zhuān)家比對研究后發(fā)現德?tīng)査局旮腥菊叩暮粑啦《据d量是原始毒株感染者的1260倍，患者樣本的核酸檢測Ct值非常低（越低表示體內病毒載量越高）。這說(shuō)明，德?tīng)査局甑淖晕覐椭扑俣确浅Ｑ该?。此外，攜帶德?tīng)査局甑娜丝赡軙?huì )更快地具有傳染性。研究指出，早期原始毒株在人體內可被檢測出來(lái)的時(shí)間為6天，而德?tīng)査局陜H需4天就能被檢測出。

德?tīng)査局旮腥菊?strong style="box-sizing: border-box;">病毒載量高，應該更容易被檢出，那么還會(huì )有漏檢的風(fēng)險嗎？今天小編帶您揭秘預擴增試劑面對高載量病毒時(shí)的漏檢原理。

首先讓我們了解一下什么是預擴增：預擴增是在逆轉錄之后，正式開(kāi)始PCR循環(huán)之前，設置10個(gè)左右不采集熒光信號的循環(huán)。常規和預擴增PCR程序設置區別如下，見(jiàn)下圖（預擴增的3和4是增加的步驟）：

常規PCR新冠核酸檢測試劑程序：

設置了預擴增的檢測試劑程序：

設置預擴增是為了快速提高模板濃度，在后續帶有熒光采集信號的循環(huán)階段，因為有了前期的預擴增階段對模板的充分擴增，就可以縮短信號采集的時(shí)間，將原本需要90-100分鐘的擴增過(guò)程縮短至30-40分鐘完成。

那超強變異株德?tīng)査局甑暮怂釞z測情況是什么樣的？因德?tīng)査局瓴《据d量高，Ct值會(huì )更低，在15-20個(gè)Ct左右，甚至有樣本Ct值在個(gè)位數的情況出現，檢測曲線(xiàn)如下圖所示，同時(shí)儀器判定為陽(yáng)性。

那新冠核酸檢測試劑如果設置了預擴增，檢測曲線(xiàn)會(huì )發(fā)生什么變化？設置了預擴增的新冠核酸檢測試劑擴增曲線(xiàn)（圖例僅示意），前10個(gè)循環(huán)無(wú)熒光信號，從11個(gè)循環(huán)開(kāi)始采集熒光。出現病毒載量超高的德?tīng)査儺愔闏t值為個(gè)位數時(shí)，這10個(gè)循環(huán)在有預擴增的程序中，儀器將檢測不到指數增長(cháng)的起始熒光，最后判定為陰性。

為什么一個(gè)簡(jiǎn)單的預擴增設置會(huì )導致病毒載量較高的德?tīng)査局曜詈蟮臋z測結果變成假陰性？讓我們從實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測原理來(lái)看。實(shí)時(shí)熒光PCR的曲線(xiàn)分為基線(xiàn)期、指數增長(cháng)期、線(xiàn)性增長(cháng)期與平臺期。（如下圖）

線(xiàn)性圖譜中的基線(xiàn)期，是通過(guò)PCR儀內部的計算，將原始信號中的噪音計算成熒光信號為“0”的直線(xiàn)，以基線(xiàn)為參照，后續的熒光信號才被計算機轉化為S型曲線(xiàn)。

在普遍情況下，前十幾個(gè)循環(huán)以?xún)韧际窃胍?/strong>，所以大多數PCR儀的自動(dòng)基線(xiàn)范圍會(huì )在3-15。

而設置了預擴增（例如10個(gè)），前10個(gè)循環(huán)無(wú)熒光信號，從11個(gè)循環(huán)開(kāi)始采集熒光。那么，當遇到病毒載量非常高的樣本，在普通熒光PCR反應中，可能在10個(gè)循環(huán)以?xún)染鸵呀?jīng)開(kāi)始出現指數增長(cháng)期，而這10個(gè)循環(huán)在有預擴增的程序中，儀器將檢測不到指數增長(cháng)的起始熒光（指數增長(cháng)期與閾值線(xiàn)的交點(diǎn)即為Ct值），從而丟失了確保S型擴增曲線(xiàn)完整的關(guān)鍵信號。

因此，帶有預擴增的程序，在當前德?tīng)査儺愔隇橹髁餍蛣e的情況下，有非常大的漏檢風(fēng)險。而且，這樣的漏檢并非是我們常常關(guān)注的弱陽(yáng)性樣本，而是風(fēng)險極大的強陽(yáng)性樣本，越強越容易漏檢。